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细解弓形虫试剂盒操作程序与结果判断
  • 发布日期:2019-04-08      浏览次数:48
    •   弓形虫试剂盒原理:
        弓形虫试剂盒系由预包被弓形虫(TOX)重组抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中弓形虫抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有弓形虫抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有弓形虫抗体。
        弓形虫试剂盒产品特点:
        操作简单:无需专业人员也可完成样本的分子层面检测。
        检测快速:5-15min内出检测结果,实现真正意义上的“快检”!
        结果准确:灵敏度高,特异性强,精准识别目标基因片段,所得结果准确无误;
        常温反应:30-42℃的常温恒温反应,无需另购热循环仪或其他昂贵设备。
        冻干工艺:采用先进的冻干工艺技术,将其制成干粉试剂,可直接上机检测,与液态试剂相比操作使用简便,避免因移液误差带来的损耗,同时也便于运输,避免在运输或者使用过程中反复冻融带来损耗;
        弓形虫试剂盒操作程序:
        1.洗涤液配制,用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液(2号液)按1:10稀释,如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水充分混匀即为工作洗涤液。
        2.样本稀释,用样本稀释液(5号液)将待检血清样本按1:100稀释,如取5ul样本与495ul样本稀释液,混匀。 阴性、阳性对照品不用稀释,直接加样。
        3.加样反应,每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔(分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100ul)。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100ul。37℃避光反应30分钟后,甩去孔内液体,每孔注满工作洗涤液洗涤3次,每次均需停留1分钟后再甩净,拍干。
        4.加酶反应,除空白对照孔外,每孔加酶结合物(1号液) 1滴。37℃避光反应30分钟后,甩去孔内液体,如上洗涤,拍干。
        5. 显色反应,加底物液(3号液)和显色剂(4号液)各1滴,混匀,37℃避光显色10分钟。加终止液(6号液)1滴,终止反应(加终止液后,蓝色会变为黄色)并判读结果。
        弓形虫试剂盒结果判断:
        以空白对照调零,用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度(A值)。当待检样本孔A值大于等于阴性对照A值的2.1倍者判为阳性。如阴性对照A值低于0.07时,按0.07计算。
        弓形虫试剂盒一般采用冷链运输,并采用最快速的运输方式,缩短运输时间;冬季运输应注意防止制品冻结。试剂盒储存条件为2℃~8℃,有效期为8个月。
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