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白介素elisa试剂盒原理与操作
  • 发布日期:2019-03-12      浏览次数:77
    • 白介素elisa试剂盒

      实验原理:本试剂盒应用双抗体加心法测定标本中人白细胞介素-25(IL-25)水平。用纯化的人IL-25抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素-25(IL-25),再与HRP标记的IL-25抗体结合,形成抗体抗原美标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下准话成蓝色,并在算的作用下转化成最终黄色。颜色的深浅和样品中的IL-25呈正相关。用酶标仪在-450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品多种人白细胞介素-25(IL-25)浓度。

      操作步骤:

      标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100ul,然后在第一、第二孔中加标准欧尼稀释液50ul,混匀;然后一孔、第二孔中各取100ul分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50ul,幻云,然后在第三孔和第四孔中先各取50ul弃掉,再各取50ul分别加到第五、第六孔中,再在第五第六孔中分别加便准品稀释液50ul,混匀,混匀后从第五、第六空中风去50ul分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀后从第七、第八孔中分别去50ul加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50ul,混匀后从第九第十孔中各取50ul弃掉。

      加样:分别设空白孔、待测空白孔。在酶标包被板上待测样品孔重甲样品稀释液40ul,然后再加待测样品10ul.加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻欢动混匀。

      温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

      配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

      洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

      加酶:每孔加入酶标试剂50ul,空白孔除外

      显色:每孔先假如显色剂A50ul,再加入显色剂B50ul,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。

      终止:每孔加终止液50ul,终止反应。

      测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度。测定应再加终止液后15分钟内进行

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