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大鼠 MTL elisa检测试剂盒实验原理和操作方法

点击次数:46 发布时间:2019/1/18
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 实验原理:

 将目标抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的抗体结合,然后加入微生物化的目标抗体,将未结合的生物素抗体洗净后,加入HRP标记和亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓

 操作方法

1。 实验前 20 分钟从冰箱中取出试剂盒,以平衡至室温(20-25℃);

2. 取出所需数量的板条,其余密封放回 4℃;

3. 建立标准曲线:设标准孔 8 孔,每孔中各加入样品稀释液 100ul,一孔加标准品 100nl,混匀后用加样器吸出 100ul,移至第二孔。如此反复对倍稀释至第七孔,,从第七孔中吸出 100ul 弃去,使之体积均为 100ul。第八孔为空白对照;

4。 加样:待测品孔中每孔加入待测样品 100ul;

5. 将反应板置 37℃120 分钟;

6。 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干;

7。 每孔中加入一抗体工作液 50ul;

8。 将反应板充分混匀后置 37℃60 分钟。

9。 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干;

10. 每孔加酶标抗体工作液 100uL. 11. 将反应板置 37℃60 分钟。

12。 洗板:同前。

13. 每孔加入底物液 100uL,置 37℃暗处反应 5-10 分钟。

14. 每孔加入 50uL 终止液混匀。

15。 在 450nm 处测吸光值。(应尽快,时间过长可能导致本底偏高)

 
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