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猪α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒操作步骤及注意事项
  • 发布日期:2019-05-22      浏览次数:12
    •                              猪α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒操作步骤及注意事项

      【操作步骤】

      1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

      2、温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

      3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

      4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

      5、加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。

      6、显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟。

      7、终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

      8、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

       

      【注意事项】

      1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

      2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

      3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

      4、请每次测定的同时做标准曲线,zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

      5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      6、底物请避光保存。

      7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

      8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

      9、本试剂不同批号组分不得混用。

      10、如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

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